产品与服务

PRODUCT CENTER

培养皿使用方法:

uploads/image/20220614/1655188638.png

本产品适用的细胞系包括但不限于:人脐带来源的间充质干细胞、人脂肪来源的间充质干细胞、人骨髓来源的间充质干细胞、人来源的皮肤成纤维细胞。但使用本产品制备本说明规定以外的其他细胞系的细胞薄膜,其体外培养条件以及所使用培养基需要相应做出调整,建议客户在使用本产品时应特别注意。

客户在购买并收到产品后,请检查无菌外包装是否破损,培养皿结构是否出现破碎或者裂痕,是否存在目检可见的污染物等,若存在上述问题请勿继续使用本产品。

由于实验所用试剂、操作环境以及操作手法的差异,下列方法仅供客户参考,以人脐带来源的间充质干细胞为例:

1. 细胞接种

(1)本例中所使用的人脐带来源的间充质干细胞的最佳培养代数为7代及以下。对于人脐带来源的间充质干细胞,本说明推荐使用的完全培养基为Takara Cellartis人间充质干细胞培养基(Xeno-Free级别,Cat.No Y50200),并加入抗坏血酸至浓度为50μmol/L。取本产品按照表-1所建议的细胞密度进行接种。将培养皿放入37℃、5%二氧化碳、湿度饱和的细胞培养箱中培养。

规格

培养面积(cm2

接种密度(个

培养基用量(毫升)

PCCD35mm

8.8

0.2 x 106

1.5

PCCD60mm

21.5

0.5 x 106

4.0

PCCD100mm

56.7

1.0 x 106

10.0

(2)定期观察细胞生长状态,待细胞生长至过饱和状态后(100%融合度),可用于进行下一步操作。

2. 细胞薄膜的分离和提取

(1)吸出培养皿中的培养基,取等量D-PBS缓缓加入培养皿中洗除残留培养基。

(2)从边缘缓缓吸出D-PBS,取出一片符合培养皿大小的支撑物(此处插入货号)并小心地将其放入培养皿中。在放入过程中应避免支撑物与细胞薄膜表面发生摩擦,从而破坏细胞薄膜的完整性。

(3)向支撑物的表面缓慢滴加D-PBS,在浸润支撑物的同时使得D-PBS完全覆盖培养皿表面。

(4)室温下静置孵育20分钟(注意,不同细胞系细胞薄膜所需的孵育时间可能不同,需要根据具体细胞系进行优化。

(5)孵育完成后,以洁净镊子夹起支撑物边缘,将支撑物连同细胞薄膜一起揭下。即可看到贴附于支撑物的细胞薄膜。

(6)将细胞薄膜连同支撑物转移至移植处表面,如损伤皮肤、器官、或洁净培养皿表面,以0.9%氯化钠注射液缓缓冲洗支撑物的无细胞面,促进细胞薄膜和支撑物的分离。待细胞薄膜与支撑物分离并贴附于目标移植处表面,移除支撑物。

注意事项

(1) 在整个细胞培养以及操作过程中,请注意保持无菌操作。

(2) 本说明所推荐的细胞使用代数为7代以及以下。

(3) 为达到最佳的成膜以及脱膜效果,培养细胞所用培养基中应适当加入抗坏血酸至浓度为16-60μmol/L。